中喬新舟朋友圈集贊活動：49元領無血清細胞凍存液
從克隆的但是表型各異的MC3T3-E1細胞系中分離出一系列亞克隆。 從含抗壞血酸培養基生長的成骨細胞中選擇高或低成骨細胞分化、礦化的亞克隆。 MC3T3亞克隆4（ATCC CRL-2593）和MC3T3亞克隆14（ATCC CRL-2594）在抗壞血酸和3到4mM無機磷酸鹽中生長表現出高水平的成骨細胞分化。 它們10天后形成一個礦化良好的細胞外基質（ECM）。
MC3T3亞克隆24（ATCC CRL-2595）和MC3T3亞克隆30（ATCC CRL-2596）在抗壞血酸中生長表現出很差的成骨細胞分化。 不形成ECM， 可以作為亞克隆4和14的陰性對照。 礦化的亞克隆選擇的表達作為成骨細胞標記的mRNA，及唾液酸糖蛋白（BSP），骨鈣素（OCN），和甲狀旁腺激素/甲狀旁腺激素相關蛋白受體的mRNA。 高或者低的分化潛能的亞克隆在培養中生產出相似數量的膠原質，表達可比較的基本水平的mRNA編碼Osf2/Cbfa1，一種成骨細胞相關轉錄因子。
細胞的培養
培養條件
培養基：MEM α +10%胎牛血清+1%雙抗（注意：MEM α 不含VC組分）
推薦傳代比例：1：4-1：8
換液頻率： 2-3次/周 2-3次/周
培養條件： 5% CO₂，37°C
2 成骨誘導分化實驗步驟
①由于誘導時間比較長，建議提前使用明膠包被6孔板。（注意此處是為了減少誘導過程細胞漂起、不貼壁）
②建議取第3~5代、純度達90%以上、狀態良好的MC3T3-E1細胞，將其消化下來，離心收集，使用MC3T3-E1細胞完全培養基調整細胞密度為1~5×105個cell/mL，均勻鋪于6孔板中，每孔2mL，置于37℃恒溫細胞培養箱中培養。（注意：此處細胞密度及培養液體積以6孔板為例，若為其它培養器皿，請根據實際情況調整細胞密度及培養液體積。）
③待細胞匯合度達80%~100%時，即可進行誘導分化。
④小心吸棄細胞培養上清，沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導分化完全培養基，每孔2mL，置于37℃恒溫細胞培養箱中培養。（注意：完全培養基加入細胞前需提前置于37℃預熱。）
⑤每2day換用新鮮的誘導分化完全培養基。由于細胞量比較大，培養液顏色會偏黃色屬于正�，F象，及時換液即可。（注意：完全培養基加入細胞前需提前置于37℃預熱。）
⑥細胞誘導3周后，即可進行茜素紅染色鑒定。
⑦誘導過程中，已經成骨的MC3T3-E1細胞會變褐色和變圓。
3.鑒定方法
A.茜素紅染色分析
① 細胞誘導分化結束后，小心吸棄細胞培養上清，1×PBS潤洗1~2次。每孔加入1mL細胞固定液，室溫固定15-30 min。（注意：操作一定要輕柔。）
② 吸棄細胞固定液，1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入茜素紅染色液，每孔1mL，室溫染色30min。（注意：染色液底部可能會有沉淀，吸取時盡量不要觸及底部。若細胞染色后有沉淀，1×PBS洗去即可。）
③ 吸出染色液，1×PBS潤洗，去掉浮色。顯微鏡下觀察細胞染色效果，鈣鹽呈較深的橙紅色。
④光鏡拍照建議留一些pbs,減少光圈的出現，以便呈現更好的成骨效果。
B.成骨相關轉錄因子
礦化亞克隆選擇性表達成骨細胞標志物、骨唾液蛋白 （BSP）、骨鈣素 （OCN） 堿性磷酸酶（ALP） 骨橋蛋白（OPN）、I型膠原（COL I）和甲狀旁腺激素 （PTH）/甲狀旁腺激素相關蛋白 （PTHrP） 受體的 mRNA。相關引物序列如下 
參考文獻
標題：Inhibiting Osteolytic Breast Cancer Bone Metastasis by Bone-Targeted Nanoagent via Remodeling the Bone Tumor Microenvironment Combined with NIR-II Photothermal Therapy
作者：Yaoxun Zeng, Zhenxing Pan, Jiongpeng Yuan, Yuqiong Song, Zhenzhen Feng, Zefeng Chen, Zhaoyi Ye, Yushan Li, Ying Bao, Zhili Ran, Xinyi Li, Huiling Ye, Kun Zhang, Xujie Liu, Yan He
期刊：Small
DOI：First published: 21 May 2023
影響因子 ：15.153
引用產品：ZQ0118，ZQ0095，ZQ0098
網址：https://doi.org/10.1002/smll.202301003
標題：Amino-Functionalized Zirconium-Based Metal–Organic Frameworks as Bifunctional Nanomaterials to Treat Bone Tumors and Promote Osteogenesis.(2023-11-09)
作者：Jongpeng Yuan,Xujie Liu
期刊：ACS Applied Materials & Interfaces
DOI: 10.1021/acsami.3c11787
影響因子 ：9.5
引用產品：MC3T3-E1, MNNG/HOS and MDA-MB-231 cell
網址：https://pubs.acs.org/doi/full/10.1021/acsami.3c11787
茜紅素染色結果參考圖
相關產品推薦
1、 MEMα 基礎培養基（ ZQ-700-VC-FREE ）
2、MEMα 完全培養基（ZQ-720-VCF ）
3、MC3T3-E1細胞成骨誘導分化試劑盒（CSP080）
49元領細胞凍存液啦！
該無血清凍存液為即用型產品，配方成分明確，不含動物來源性蛋白，不含血清。不僅降低了各類細菌、病毒、支原體等污染風險，保證凍存細胞的安全，而且減少外源性蛋白對細胞正常生長和分化的影響此外，該凍存液中含有 DMS0、葡萄糖等各種細胞營養成分，可以有效提高細胞存活率和活力，適用于各種動物細胞(細胞系和原代細胞)的凍存。具有以下幾個優點：
1、不含動物源成分，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低，各批產品之間有更高的產品質量一致性
2、成分明確，無批次差異
3、可直接存放于-80°C冰箱凍存，無需經過費時的程序降溫過程(省時、省力、省錢)
4、獨特配方有效提高細胞凍存存活率及復蘇率
5、即用型，無需現配，即開即用
6、可微量，原位凍存，例如雜交瘤細胞的凍存省時高效
7、通用型，適用于凍存各種細胞系，原代細胞
1、活動日期：2024年3月1日-2024年3月31日
2、活動對象：僅限終端客戶參與活動
3、兌現日期：2024年4月15日（由公司統一配送到當地代理）
4、領取地點：各區域代理
5、活動詳情：如對本活動有疑問，請關注中喬新舟公眾號與我們聯系
6、本活動最終解釋權歸中喬新舟所有
MC3T3亞克隆24（ATCC CRL-2595）和MC3T3亞克隆30（ATCC CRL-2596）在抗壞血酸中生長表現出很差的成骨細胞分化。 不形成ECM， 可以作為亞克隆4和14的陰性對照。 礦化的亞克隆選擇的表達作為成骨細胞標記的mRNA，及唾液酸糖蛋白（BSP），骨鈣素（OCN），和甲狀旁腺激素/甲狀旁腺激素相關蛋白受體的mRNA。 高或者低的分化潛能的亞克隆在培養中生產出相似數量的膠原質，表達可比較的基本水平的mRNA編碼Osf2/Cbfa1，一種成骨細胞相關轉錄因子。
本期為大家總結了，在誘導MC3T3-E1細胞過程中的注意事項和具體操作步驟。
細胞的培養
培養條件
培養基：MEM α +10%胎牛血清+1%雙抗（注意：MEM α 不含VC組分）
推薦傳代比例：1：4-1：8
換液頻率： 2-3次/周 2-3次/周
培養條件： 5% CO₂，37°C
2 成骨誘導分化實驗步驟
①由于誘導時間比較長，建議提前使用明膠包被6孔板。（注意此處是為了減少誘導過程細胞漂起、不貼壁）
②建議取第3~5代、純度達90%以上、狀態良好的MC3T3-E1細胞，將其消化下來，離心收集，使用MC3T3-E1細胞完全培養基調整細胞密度為1~5×105個cell/mL，均勻鋪于6孔板中，每孔2mL，置于37℃恒溫細胞培養箱中培養。（注意：此處細胞密度及培養液體積以6孔板為例，若為其它培養器皿，請根據實際情況調整細胞密度及培養液體積。）
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④小心吸棄細胞培養上清，沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導分化完全培養基，每孔2mL，置于37℃恒溫細胞培養箱中培養。（注意：完全培養基加入細胞前需提前置于37℃預熱。）
⑤每2day換用新鮮的誘導分化完全培養基。由于細胞量比較大，培養液顏色會偏黃色屬于正�，F象，及時換液即可。（注意：完全培養基加入細胞前需提前置于37℃預熱。）
⑥細胞誘導3周后，即可進行茜素紅染色鑒定。
⑦誘導過程中，已經成骨的MC3T3-E1細胞會變褐色和變圓。
3.鑒定方法
A.茜素紅染色分析
① 細胞誘導分化結束后，小心吸棄細胞培養上清，1×PBS潤洗1~2次。每孔加入1mL細胞固定液，室溫固定15-30 min。（注意：操作一定要輕柔。）
② 吸棄細胞固定液，1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入茜素紅染色液，每孔1mL，室溫染色30min。（注意：染色液底部可能會有沉淀，吸取時盡量不要觸及底部。若細胞染色后有沉淀，1×PBS洗去即可。）
③ 吸出染色液，1×PBS潤洗，去掉浮色。顯微鏡下觀察細胞染色效果，鈣鹽呈較深的橙紅色。
④光鏡拍照建議留一些pbs,減少光圈的出現，以便呈現更好的成骨效果。
B.成骨相關轉錄因子
礦化亞克隆選擇性表達成骨細胞標志物、骨唾液蛋白 （BSP）、骨鈣素 （OCN） 堿性磷酸酶（ALP） 骨橋蛋白（OPN）、I型膠原（COL I）和甲狀旁腺激素 （PTH）/甲狀旁腺激素相關蛋白 （PTHrP） 受體的 mRNA。相關引物序列如下
參考文獻
標題：Inhibiting Osteolytic Breast Cancer Bone Metastasis by Bone-Targeted Nanoagent via Remodeling the Bone Tumor Microenvironment Combined with NIR-II Photothermal Therapy
作者：Yaoxun Zeng, Zhenxing Pan, Jiongpeng Yuan, Yuqiong Song, Zhenzhen Feng, Zefeng Chen, Zhaoyi Ye, Yushan Li, Ying Bao, Zhili Ran, Xinyi Li, Huiling Ye, Kun Zhang, Xujie Liu, Yan He
期刊：Small
DOI：First published: 21 May 2023
影響因子 ：15.153
引用產品：ZQ0118，ZQ0095，ZQ0098
網址：https://doi.org/10.1002/smll.202301003
標題：Amino-Functionalized Zirconium-Based Metal–Organic Frameworks as Bifunctional Nanomaterials to Treat Bone Tumors and Promote Osteogenesis.(2023-11-09)
作者：Jongpeng Yuan,Xujie Liu
期刊：ACS Applied Materials & Interfaces
DOI: 10.1021/acsami.3c11787
影響因子 ：9.5
引用產品：MC3T3-E1, MNNG/HOS and MDA-MB-231 cell
網址：https://pubs.acs.org/doi/full/10.1021/acsami.3c11787
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3、MC3T3-E1細胞成骨誘導分化試劑盒（CSP080）
49元領細胞凍存液啦！
該無血清凍存液為即用型產品，配方成分明確，不含動物來源性蛋白，不含血清。不僅降低了各類細菌、病毒、支原體等污染風險，保證凍存細胞的安全，而且減少外源性蛋白對細胞正常生長和分化的影響此外，該凍存液中含有 DMS0、葡萄糖等各種細胞營養成分，可以有效提高細胞存活率和活力，適用于各種動物細胞(細胞系和原代細胞)的凍存。具有以下幾個優點：
1、不含動物源成分，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低，各批產品之間有更高的產品質量一致性
2、成分明確，無批次差異
3、可直接存放于-80°C冰箱凍存，無需經過費時的程序降溫過程(省時、省力、省錢)
4、獨特配方有效提高細胞凍存存活率及復蘇率
5、即用型，無需現配，即開即用
6、可微量，原位凍存，例如雜交瘤細胞的凍存省時高效
7、通用型，適用于凍存各種細胞系，原代細胞
活動說明
轉發本文到朋友圈，集贊滿49個，即可49元獲得無血清細胞凍存液1瓶（規格50ML 貨號：CSP042）
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1、活動日期：2024年3月1日-2024年3月31日
2、活動對象：僅限終端客戶參與活動
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5、活動詳情：如對本活動有疑問，請關注中喬新舟公眾號與我們聯系
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